中國(guó)水產(chǎn)頻道報(bào)道，鯉科皰疹病毒III型是皰疹病毒科中具有強(qiáng)致性和強(qiáng)傳染性的成員，對(duì)該病毒的檢測(cè)方法主要是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、免疫組化法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(PCR法)和環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法(LAMP)，這些方法由于在操作簡(jiǎn)便性、檢測(cè)靈敏度、檢測(cè)準(zhǔn)確性和現(xiàn)場(chǎng)可操作性等方面存在的問(wèn)題而使用受限。 近期，美國(guó)俄勒岡州立大學(xué)的科學(xué)家公布了一種檢測(cè)鯉科皰疹病毒III型的方法——重組酶聚合酶擴(kuò)增法并結(jié)合核酸試紙檢測(cè)，大大降低了操作的復(fù)雜性，提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。該方法只需對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的預(yù)處理，在37℃條件下完成病毒DNA的擴(kuò)增，并使用核酸檢測(cè)試紙對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，全部過(guò)程只需30分鐘，可檢出10個(gè)拷貝數(shù)的病毒基因組DNA，陽(yáng)性檢出率高于熒光定量PCR，真正實(shí)現(xiàn)了塘邊檢測(cè)。 重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)是Piepenburg等于2006年首先提出的一種新型的核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，主要依賴(lài)于重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白和鏈置換DNA聚合酶這三種酶，最適宜反應(yīng)溫度在37℃——42℃之間，無(wú)需復(fù)雜的樣品前處理和核酸變性，可擴(kuò)增DNA和RNA，一般可在10分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物，同時(shí)可實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)讀取和多個(gè)模板的同步檢測(cè)，被認(rèn)為可真正替代PCR的技術(shù)。由于該方法是在恒溫下完成核酸的擴(kuò)增，結(jié)合核酸檢測(cè)試紙，可在養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)推廣使用，具有廣闊的應(yīng)用前景。 |
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