抗白斑南美白對(duì)蝦的研究

譯者本人在讀了這篇文章后覺(jué)得此研究比較有新意，而且很可能對(duì)抗白斑病毒種蝦的選育產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響，故翻譯出來(lái)供中國(guó)的讀者一起分享，由于譯者本人水平有限疏漏在所難免，敬請(qǐng)斧正。

近期在美國(guó)亞利桑那大學(xué)的水產(chǎn)動(dòng)物病害實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了抗白斑種蝦的研究，此次試驗(yàn)中使用了高強(qiáng)白斑病毒株進(jìn)行抗性研究，被試驗(yàn)的三個(gè)家系在經(jīng)過(guò)白斑抗性試驗(yàn)后成活率為23% - 57%。但是陽(yáng)性對(duì)照的SPF組經(jīng)過(guò)試驗(yàn)后0%存活，試驗(yàn)中三個(gè)家系中存活下來(lái)的個(gè)體沒(méi)有一個(gè)感染白斑病毒可能對(duì)白斑病毒產(chǎn)生了抗性。

來(lái)自CAMACO的抗白斑對(duì)蝦F8、 F9和F12三代是10年前（2001年）實(shí)驗(yàn)室白斑病毒感染后存活下的種蝦通過(guò)多代選擇育種發(fā)展而來(lái)，在本研究中，根據(jù)試驗(yàn)對(duì)象的重量對(duì)F8、F9和F12代進(jìn)行白斑病毒感染。

研究的3個(gè)試驗(yàn)組分別是：

A： LP-1， F9 代通過(guò)一雄一雌人工受精獲得；

B： LP-2， F11 混合選擇的雌性個(gè)體和LP-1家系自然交配獲得的F8代雄性個(gè)體交配獲得；

C：LP-3 ，從F12 代中獲得，是從個(gè)體選育和抗白斑家系混合群體中混合選擇和自然交配獲得；

一、試驗(yàn)的準(zhǔn)備

從CAMACO運(yùn)送到亞利桑那大學(xué)病害實(shí)驗(yàn)室的南美白蝦個(gè)體重量為1.5克，試驗(yàn)蝦以50-96只/M3的密度放養(yǎng)在存有鹽度為30‰，溫度26℃的人工海水玻璃桶內(nèi)。暫養(yǎng)3天后進(jìn)行白斑感染試驗(yàn)。

試驗(yàn)包含3個(gè)陰性對(duì)照組，每個(gè)家系一個(gè)陰性對(duì)照，其他6個(gè)桶用于白斑病毒感染試驗(yàn)每個(gè)家系有兩個(gè)桶做平行對(duì)照，并且設(shè)立一個(gè)SPF白蝦陽(yáng)性對(duì)照組（試驗(yàn)材料來(lái)源于某養(yǎng)殖場(chǎng)，平均規(guī)格1.5克）。

白蝦陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組飼喂同樣的白斑感染組織，每個(gè)試驗(yàn)桶都有足夠的溶氧，并且有良好的水質(zhì)過(guò)濾系統(tǒng)，同時(shí)桶上覆蓋有塑料膜以最大程度降低溫度波動(dòng)對(duì)試驗(yàn)蝦的影響。

二、白斑感染試驗(yàn)

白斑感染實(shí)驗(yàn)所用的白斑病毒為在中國(guó)分離的 WSSV-95 白斑病毒，因?yàn)檫@個(gè)病毒經(jīng)常被用在大學(xué)的實(shí)驗(yàn)室里進(jìn)行毒性試驗(yàn)，而且自從1995年分離出這個(gè)病毒后它的毒性持續(xù)性比較好。

白蝦陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組按照體重的5%飼喂白斑感染動(dòng)物碎肉，第二天起開(kāi)始投喂正常的蝦飼料。 每天記錄死蝦數(shù)量和瀕死蝦數(shù)量，死蝦保存在-70℃冰箱內(nèi)， 瀕死蝦和存活蝦在飼養(yǎng)17天后保存在固定劑中，用組織學(xué)方法確認(rèn)是否有白斑感染。另外，每組取5只存活個(gè)體冰凍并且用qPCR 方法測(cè)定是否有白斑感染和感染病毒數(shù)量。

三、結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)陰性對(duì)照桶的成活率分別為95，98，100%， 陽(yáng)性SPF蝦對(duì)照桶病毒感染6天后成活率為0%，而實(shí)驗(yàn)組的存活率分別為L(zhǎng)P1，23%；LP2，57%；LP3，26%。（見(jiàn)表1）

亞利桑那大學(xué)自1996年到2010年對(duì)176個(gè)家系進(jìn)行了白斑抗性試驗(yàn)，試驗(yàn)成活率從0%到25%，平均成活率為5%， 但是絕大多數(shù)沒(méi)有存活。偶然一個(gè)家系有1-5個(gè)存活個(gè)體，一個(gè)家系最高的存活個(gè)數(shù)也就是5個(gè)。但是此次試驗(yàn)即使每個(gè)組中白斑感染嚴(yán)重的個(gè)體直到試驗(yàn)停止前的兩天才停止死亡，但白斑毒性試驗(yàn)后總體成活率很高，非常振奮人心。

四、組織學(xué)觀察

在這個(gè)試驗(yàn)開(kāi)始前，對(duì)所試驗(yàn)蝦組織學(xué)檢查沒(méi)有任何白斑，桃拉和其他主要蝦病感染的跡象。但在投喂白斑病毒感染組織4天后所有瀕死蝦中白斑病感染的嚴(yán)重程度非常高，原因在于：感染組織的嗜堿性粒細(xì)胞核內(nèi)包涵體大量增值的緣故。

白斑病毒有抗凋亡基因，例如：澳洲紅螯螯蝦在感染白斑病很嚴(yán)重的情況下但不會(huì)大量死亡。也許在這3個(gè)家系抗白斑的研究中之所以有相對(duì)較高的成活率，和白斑病毒的抗凋亡的正調(diào)控作用有關(guān)。對(duì)蝦凋亡基因或者和對(duì)蝦凋亡基因相關(guān)的正調(diào)控伴隨著高頻的白斑病毒的復(fù)制最終降低或者延遲了對(duì)蝦的死亡。

盡管如此但是，本次試驗(yàn)就沒(méi)能佐證白斑病毒的抗凋亡的正調(diào)控理論。此次試驗(yàn)對(duì)蝦寄主存活在試驗(yàn)結(jié)束的第17天時(shí)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何白斑病毒感染的組織學(xué)癥狀，也沒(méi)有被qPCR方法測(cè)定到白斑病毒的含量。

 在白斑病毒能檢出的最小量前提下，此次研究發(fā)現(xiàn)所有三個(gè)家系的存活個(gè)體沒(méi)有感染白斑病毒（即使在同一個(gè)家系中，同一個(gè)飼養(yǎng)容器內(nèi)其他個(gè)體均由于白斑感染死亡的情況下）或者是這些家系有足夠的能力將病毒含量控制到qPCR能檢測(cè)到的濃度以下。（見(jiàn)表2）

文/ Jorge Cuellar-Anjel 等  譯/科那灣海洋資源公司 史建國(guó)

（編注：原文載于GAA（全球水產(chǎn)宣言）雜志；譯者個(gè)人電郵mgshrimp@hotmail.com，如果大家對(duì)譯文有不清楚的地方，可與作者聯(lián)系）

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