| 通威股份動(dòng)物保健研究所生物技術(shù)部 中國(guó)水產(chǎn)頻道報(bào)道，據(jù)通威報(bào)消息，無(wú)乳鏈球菌根據(jù)藍(lán)斯費(fèi)氏群分類(lèi)為B群鏈球菌，可感染多種水產(chǎn)動(dòng)物，引起羅非魚(yú)、虹鱒、海鯉和鯔魚(yú)等魚(yú)類(lèi)敗血癥和腦膜炎，具有較高的致病率和致死率。近年來(lái)由無(wú)乳鏈球菌引起的羅非魚(yú)暴發(fā)性疾病在我國(guó)廣東、廣西、海南和福建等地區(qū)時(shí)有發(fā)生，暴發(fā)范圍廣，死亡率極高。 目前，臨床上對(duì)無(wú)乳鏈球菌的檢測(cè)方法主要依靠對(duì)患病樣品的癥狀觀察以及對(duì)病原物的鏡檢、分離、培養(yǎng)和生化鑒定，但這些方法或者依靠經(jīng)驗(yàn)，極易導(dǎo)致誤診，或者操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，不利于臨床上人們對(duì)患病魚(yú)的快速診斷。 隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)在檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物致病菌方面得以廣泛應(yīng)用。PCR技術(shù)檢測(cè)的靶標(biāo)是病原菌的遺傳物質(zhì)也即核酸，由于特定物種的核酸序列具有獨(dú)特的排列順序，因此PCR技術(shù)具有極強(qiáng)的檢測(cè)特異性;PCR技術(shù)也是一種核酸物質(zhì)的擴(kuò)增放大技術(shù)，PCR反應(yīng)結(jié)束以后病原菌的核酸序列可被放大至少千萬(wàn)倍，因此具有極高的檢測(cè)靈敏度。 根據(jù)無(wú)乳鏈球菌兩個(gè)高度保守的毒力基因設(shè)計(jì)了針對(duì)這兩個(gè)基因的特異性引物，建立了快速、準(zhǔn)確的無(wú)乳鏈球菌雙重PCR快速檢測(cè)方法。 結(jié)合快速簡(jiǎn)便的樣品處理技術(shù)，該P(yáng)CR方法可在四個(gè)小時(shí)之內(nèi)(包括制備樣品)對(duì)送檢的樣品進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷，診斷結(jié)論包括是否無(wú)乳鏈球菌、在哪些組織中感染有無(wú)乳鏈球菌以及所感染的細(xì)菌的數(shù)量。 研究結(jié)果表明，動(dòng)物保健研究所建立的無(wú)乳鏈球菌PCR快速診斷方法只能特異性地檢出無(wú)乳鏈球菌及其DNA，不能檢出海豚鏈球菌、嗜水氣單胞菌、愛(ài)德華氏菌等其它病原菌;對(duì)無(wú)乳鏈球菌DNA的最低檢出濃度為7.632×10-2 ng/μL。 研究人員使用建立的方法對(duì)人工感染無(wú)乳鏈球菌的30尾羅非魚(yú)的肝臟和腎臟組織中的無(wú)乳鏈球菌直接進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果所有肝腎組織中均能檢測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果，表明所建立的PCR方法可以用于患病樣品的快速診斷。 無(wú)乳鏈球菌PCR檢測(cè)方法的建立可以對(duì)羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌的早期感染情況進(jìn)行監(jiān)控，對(duì)于羅非魚(yú)無(wú)乳鏈球菌感染病例的早期監(jiān)測(cè)和及時(shí)預(yù)防具有重要意義。 此外，通威股份動(dòng)物保健研究所還建立了海豚鏈球菌、愛(ài)德華氏菌、柱狀黃桿菌、氣單胞菌屬等其它水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見(jiàn)病原的快速診斷方法，在此基礎(chǔ)上建立了高效、準(zhǔn)確、完整的微生物快速診斷平臺(tái)，獲得發(fā)明專(zhuān)利3項(xiàng)。 微生物快速診斷平臺(tái)的建立為病原快速確診、病害早期監(jiān)測(cè)和防治以及水產(chǎn)健康養(yǎng)殖提供了重要技術(shù)保障。 |
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