“四步法”應(yīng)對羅非魚耐藥性

　　
　　近年來，羅非魚病害嚴(yán)重危害廣東、海南、廣西等地的養(yǎng)殖生產(chǎn)。為尋求有效的病害診治方法，筆者對2009-2011年實(shí)驗(yàn)室檢測的病魚病癥及病菌鑒定和藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：細(xì)菌性病的體表病癥一致性特征明顯，病菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，不以藥敏試驗(yàn)篩選的敏感藥物來防治病害已經(jīng)不能確保療效。筆者結(jié)合生產(chǎn)上病害防治的效果，提出“四步法”防治羅非魚病害的措施。
　　
　　一、材料和方法
　　
　　1、病樣檢測
　　
　　對來源于廣西21個縣區(qū)54批病樣122尾病魚進(jìn)行體表病癥和解剖病癥觀察并記錄。
　　
　　2、病菌分離
　　
　　在無菌條件下，取病魚肝臟、脾臟、腎臟、心臟、腦部組織，采用常規(guī)血平板劃線分離病菌，瓊脂平板或腦心浸液平板劃線擴(kuò)培。122尾病魚共分離到210株病菌。
　　
　　3、藥敏試驗(yàn)
　　
　　采用瓊脂平板或腦心浸液平板K-B紙片擴(kuò)散法實(shí)時進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。按2009-2011年CLSI抗菌藥物敏感性試驗(yàn)解釋標(biāo)準(zhǔn)判讀結(jié)果。以敏感菌株數(shù)占總菌株數(shù)的比率為敏感率，以耐藥株數(shù)占總菌株數(shù)的比率為耐藥率。青霉素G/10μg、氨芐青霉素/10μg、鏈霉素/10μg、慶大霉素/10μg、復(fù)方新諾明SMZ/TMP(23.75/1.25μg)、氟哌酸/10μg、恩諾沙星/30μg、環(huán)丙沙星/5μg、多粘菌素B/30μg、左氟沙星/5μg、依諾沙星/30μg、氧氟沙星/5μg藥敏紙片來源于杭州天和微生物有限公司，氟苯尼考30μg、磺胺二甲嘧啶25μg、磺胺間甲氧嘧啶（鈉）25μg、鹽酸沙拉沙星5μg藥敏紙片按標(biāo)準(zhǔn)用量自行配置而成。
　　
　　4、病菌鑒定
　　
　　采用API微生物鑒定系統(tǒng)和試劑條鑒定病菌。
　　
　　二、結(jié)果
　　
　　1、羅非魚病害危害逐年嚴(yán)重
　　
　　廣西水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病情測報結(jié)果顯示：2009-2011年，廣西養(yǎng)殖羅非魚因生物源性病害造成死魚重量分別為16.8萬千克、413.2萬千克、786.6萬千克，經(jīng)濟(jì)損失分別為141.8萬元、3730.5萬元、9506.3萬元。實(shí)驗(yàn)室檢測羅非魚病害結(jié)果也顯示：2009年檢測了來自7縣區(qū)的病樣8批，分離鑒定了3種病菌15株；2010年檢測了來自8縣區(qū)的病樣15批，分離鑒定了7種病菌77株；2011年檢測了來自13縣區(qū)的病樣31批，分離鑒定了9種病菌118株。羅非魚病害逐年嚴(yán)重趨勢明顯。
　　
　　2、細(xì)菌性病的體表病癥一致性特征明顯
　　
　　根據(jù)病魚體表不同病癥，122尾病魚可分為以下病癥類型：
　　
　�。�1）潰瘍型：8尾魚局部鱗片脫落，背鰭、胸鰭、尾鰭、尾柄腐爛，分離鑒定到嗜水氣單胞菌12株、溫和氣單胞菌2株；
　　
　�。�2）豎鱗型：1尾魚全身鱗片豎起，分離鑒定到嗜水氣單胞菌和溫和氣單胞菌各2株；
　　
　　（3）突眼型：31尾魚眼球突出或單邊眼瞎，分離鑒定到無乳鏈球菌27株、嗜水氣單胞菌13株、溫和氣單胞菌7株、類志賀鄰單胞菌1株，還有2株G-桿菌和3株G-球菌未鑒定；
　　
　�。�4）出血型：33尾魚眼周、下頜、鰭基、體側(cè)和鰓蓋內(nèi)膜出血發(fā)紅，分離鑒定到無乳鏈球菌24株、嗜水氣單胞菌12株、溫和氣單胞菌8株、惡臭假單胞菌3株、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌2株，霍亂弧菌、阪崎腸桿菌、布氏檸檬酸桿菌各1株，還有5株G-桿菌、3株G+桿菌、1株G-球菌和1株G+球菌未鑒定；
　　
　�。�5）燒尾型：15尾魚背鰭、胸鰭、尾鰭燒尾，分離鑒定到嗜水氣單胞菌12株、無乳鏈球菌7株、惡臭假單胞菌3株、陰溝腸桿菌2株、尿道寡源桿菌1株，還有2株G+桿菌未鑒定；
　　
　�。�6）無癥狀型：34尾魚體表無明顯癥狀，分離鑒定到嗜水氣單胞菌19株、無乳鏈球菌13株、溫和氣單胞菌11株、惡臭假單胞菌2株、熒光假單胞菌2株、土生拉烏爾菌和泛菌屬各1株，還有2株G+桿菌、3株G-球菌未鑒定。
　　
　　從6種體表病癥類型的病魚中均分離出2-10種病菌，細(xì)菌性病的體表病癥一致性特征明顯，僅從體表病癥來診斷病害已不可能。
　　
　　3、病菌耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重
　　
　　54批病樣122尾病魚210株病菌對氟苯尼考等15種藥物的敏感率和耐藥率見表。

　　
　　131株桿菌（G- 124株、G+ 7株）對15種藥物中的12種（除青霉素、氨芐青霉素和磺胺間甲嘧啶外）均表現(xiàn)出一定程度的敏感，敏感率均在70%以上，而敏感率最高的是慶大霉素，達(dá)87%，其次為磺胺二甲嘧啶和左氟沙星，分別為81.7%和80.9%；同時也表現(xiàn)出相應(yīng)程度的耐藥性，除慶大霉素和氟苯尼考外，耐藥率均在10%以上，而耐藥率最高的為青霉素和氨芐青霉素，達(dá)93.9%，其次為復(fù)方新諾明和磺胺間甲嘧啶，分別為54.2%和43.5%。
　　
　　79株球菌（G-72株、G+7株）對15種藥物中的氟苯尼考、青霉素、氨芐青霉素、氧氟沙星、恩諾沙星相對敏感，敏感率均在50%以上，分別為68.4%、68.4%、62%、57%、51.9%；而耐藥性則相應(yīng)較強(qiáng)，耐藥率最高的是復(fù)方新諾明，達(dá)94.9%，其次為慶大霉素、磺胺間甲嘧啶和依諾沙星，分別為87.3% 、73.4%和72.2%；耐藥率最低的是氟苯尼考，為2.5%，其余14種藥物的耐藥率均在15%以上。
　　
　　4、常規(guī)方法診治羅非魚病害效果越來越差
　　
　　在2010年8-11月開展的廣西養(yǎng)殖羅非魚病害危害情況調(diào)查中，筆者協(xié)同實(shí)驗(yàn)室檢測人員深入柳北、合浦、玉州等13個縣區(qū)調(diào)查了52戶養(yǎng)殖戶，有13戶養(yǎng)殖戶發(fā)現(xiàn)病情后按照常規(guī)細(xì)菌病治療方法用藥治療，3-5天無效后再換藥治療。如此反復(fù)，1個月內(nèi)有7戶養(yǎng)殖戶的羅非魚全部病死，其余6戶養(yǎng)殖戶的羅非魚病死率也高達(dá)70%以上。實(shí)驗(yàn)室接診的54批病樣中，有超過50%的養(yǎng)殖戶反映按常規(guī)細(xì)菌病治療方法治療無效或療效不明顯。
　　
　　5、“四步法”治療羅非魚病害效果顯著
　　
　　實(shí)驗(yàn)室接診的54批病樣中，有43戶養(yǎng)殖戶按照筆者提出的“四步法”治療，療效顯著，7-15天基本控制病情，其余11戶養(yǎng)殖戶因在羅非魚發(fā)病后大規(guī)模死亡且自行采取措施治理無效后才送檢，導(dǎo)致檢測結(jié)果出來后已無魚可治。
　　
　　“四步法”的具體操作方法為：第一步，發(fā)現(xiàn)病情先停料2-3天；第二步，發(fā)現(xiàn)病情第1天用腐植酸鈉或聚合氯化鋁改水；第三步，發(fā)現(xiàn)病情第2-4天用二氧化氯或聚維酮碘或雙季胺鹽碘（針對爛鰓）消毒水體，每天1次；第三步，發(fā)現(xiàn)病情第3-4天開始，拌飼料投喂敏感藥物加黃芪多糖等免疫恢復(fù)劑，每天1次，連續(xù)7-15天。
　　
　　三、討論
　　
　　1、僅憑體表癥狀來診斷無法做到確診病害。調(diào)查表明，122尾病魚的體表癥狀可分為潰瘍、豎鱗、突眼、出血、燒尾和無癥狀6種類型，各種體表病癥類型分別分離鑒定出2種、2種、5種、10種、6種、9種病菌，揭示了養(yǎng)殖羅非魚感染各種病菌后的體表癥狀越來越相類似，細(xì)菌性病的體表病癥一致性特征明顯。
　　
　　2、病菌的耐藥性主要是后天獲得，多次使用同類抗生素藥物就容易引起魚類病原菌產(chǎn)生耐藥性，而導(dǎo)致防治無效。
　　
　　而現(xiàn)有的抗菌藥物基本上都是針對革蘭氏陰性菌來篩選的，抗革蘭氏陽性菌的藥物非常少。調(diào)查顯示，210株病菌都存在不同程度的耐藥性，131株桿菌和79株球菌的敏感藥物譜和耐藥譜均不相同，而球菌的耐藥性更強(qiáng)些，能用于治療球菌病的藥物比較少。
　　
　　3、藥物治療細(xì)菌病的效果非常關(guān)鍵。治療病害的前提是首先對病原進(jìn)行分離，然后還要做藥物敏感性試驗(yàn)，只有這樣，才能做到對癥下藥。配合抗生素使用黃芪多糖等免疫增強(qiáng)劑可以有效提高魚體抗病能力，提高藥物防治療效，調(diào)查結(jié)果有力地證明了這一觀點(diǎn)。
　　
　　不少養(yǎng)殖戶按常規(guī)細(xì)菌病治療方法治療無效或療效不明顯就是源于藥不對癥。而“四步法”治病方法不僅做到了對癥下藥，還通過改水消除了病因，同時配合停料減輕肝臟等內(nèi)臟器官的工作壓力，外源添加免疫恢復(fù)劑提高了魚體的抗病能力，保證敏感藥物在魚體內(nèi)充分發(fā)揮作用從而達(dá)到預(yù)期療效。