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本帖最后由 水寶寶 于 2012-11-3 23:00 編輯
無乳鏈球菌根據(jù)藍斯費氏群分類為B群鏈球菌,可感染多種水產(chǎn)動物,引起羅非魚、虹鱒、海鯉和鯔魚等魚類敗血癥和腦膜炎,具有較高的致病率和致死率。近年來水產(chǎn)養(yǎng)殖中由無乳鏈球菌引起的羅非魚暴發(fā)性疾病在我國廣東、廣西、海南和福建等地區(qū)時有發(fā)生,暴發(fā)范圍廣,死亡率極高。
目前,臨床上對無乳鏈球菌的檢測方法主要依靠對患病樣品的癥狀觀察以及對病原物的鏡檢、分離、培養(yǎng)和生化鑒定,但這些方法或者依靠經(jīng)驗,極易導致誤診,或者操作繁瑣,檢測周期長,不利于水產(chǎn)養(yǎng)殖臨床上人們對患病魚的快速診斷。
研究人員使用建立的方法對人工感染無乳鏈球菌的30尾羅非魚的肝臟和腎臟組織中的無乳鏈球菌直接進行了檢測,結(jié)果所有肝腎組織中均能檢測出陽性結(jié)果,表明所建立的PCR方法可以用于患病樣品的快速診斷。
無乳鏈球菌PCR檢測方法的建立可以對羅非魚無乳鏈球菌的早期感染情況進行監(jiān)控,對于羅非魚無乳鏈球菌感染病例的早期監(jiān)測和及時預防具有重要意義。
此外,通威股份動物保健研究所還建立了海豚鏈球菌、愛德華氏菌、柱狀黃桿菌、氣單胞菌屬等其它水產(chǎn)養(yǎng)殖中常見病原的快速診斷方法,在此基礎(chǔ)上建立了高效、準確、完整的微生物快速診斷平臺,獲得發(fā)明專利3項。
微生物快速診斷平臺的建立為病原快速確診、病害早期監(jiān)測和防治以及水產(chǎn)健康養(yǎng)殖提供了重要技術(shù)保障。
隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展,聚合酶鏈式反應技術(shù)在檢測水產(chǎn)動物致病菌方面得以廣泛應用。PCR技術(shù)檢測的靶標是病原菌的遺傳物質(zhì)也即核酸,由于特定物種的核酸序列具有獨特的排列順序,因此PCR技術(shù)具有極強的檢測特異性CR技術(shù)也是一種核酸物質(zhì)的擴增放大技術(shù),PCR反應結(jié)束以后病原菌的核酸序列可被放大至少千萬倍,因此具有極高的檢測靈敏度。
根據(jù)無乳鏈球菌兩個高度保守的毒力基因設(shè)計了針對這兩個基因的特異性引物,建立了快速、準確的無乳鏈球菌雙重PCR快速檢測方法。
結(jié)合快速簡便的樣品處理技術(shù),該PCR方法可在四個小時之內(nèi)(包括制備樣品)對送檢的樣品進行準確的診斷,診斷結(jié)論包括是否無乳鏈球菌、在哪些組織中感染有無乳鏈球菌以及所感染的細菌的數(shù)量。
研究結(jié)果表明,動物保健研究所建立的無乳鏈球菌PCR快速診斷方法只能特異性地檢出無乳鏈球菌及其DNA,不能檢出海豚鏈球菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌等其它病原菌;對無乳鏈球菌DNA的最低檢出濃度為7.632×10-2 ng/μL。
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