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水產(chǎn)養(yǎng)殖中弧菌的分離檢測(TCBS培養(yǎng)基與弧菌顯色培養(yǎng)基)
flyjet
2016-7-12 23:40
水產(chǎn)養(yǎng)殖中弧菌的分離檢測 (TCBS 培養(yǎng)基與弧菌顯色培養(yǎng)基) TCBS 培養(yǎng)基分離弧菌 國標(biāo) GB4789.7-2013 食品微生物學(xué)檢測 副溶血性弧菌檢測 中 硫代硫酸鹽 - 檸檬酸鹽 - 膽鹽 - 蔗糖( TCBS )瓊脂配方: 酵母膏粉 5g ,蛋白胨 10g ,氯化鈉 10g ,檸檬酸鈉 10g ,硫代硫酸鈉 10g ,膽酸鈉 3g , 牛膽粉 5g ,蔗糖 20g ,檸檬酸鐵 1g ,瓊脂 15g ,溴麝香草酚蘭 0.04g ,麝香草酚蘭 0.04g 最終 pH 8.6 ± 0.2 TCBS 瓊脂的原理就是發(fā)現(xiàn)蔗糖發(fā)酵產(chǎn)生酸的菌落,霍亂陽性,副溶血性弧菌陰性, 副溶血性弧菌 不發(fā)酵蔗糖,菌落呈藍(lán)綠色。 霍亂弧菌 發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸,菌落呈黃色。然后,這些有機(jī)酸,也被這種細(xì)菌利用,分解成二氧化碳揮發(fā)了,有機(jī)酸沒有了,菌落就重新變成綠色的了。 該培養(yǎng)基中的牛膽粉有抑制其他革蘭氏陽性菌的作用,與枸櫞酸鈉和硫代硫酸鈉合用時(shí),對大腸桿菌有明顯抑制作用。同時(shí)枸櫞酸鈉和枸櫞酸鐵可使霍亂弧菌免受其他抑菌劑的作用,加之有營養(yǎng)豐富的酵母浸粉,霍亂弧菌又能利用蔗糖分解產(chǎn)酸,所以菌落較大,且呈黃色。大腸桿菌等雜菌菌落較小或不生長,故易識別。 黃色菌落只要是利用培養(yǎng)基中的蔗糖產(chǎn)酸,菌落就是黃色的,像溶澡弧菌、河流弧菌、麥?zhǔn)匣【、等要本培養(yǎng)基上均為黃色菌落,并不是黃色菌落就是霍亂弧菌。樣品中常常存在大量可以發(fā)酵蔗糖的干擾細(xì)菌,常常會碰到整個(gè)平板會變黃色的現(xiàn)象。 另:霍亂弧菌一旦檢出要立即送有關(guān)部門,普通實(shí)驗(yàn)室是不準(zhǔn)保存的! 黑色:細(xì)菌分解含硫物質(zhì)產(chǎn)生硫化氫同時(shí)與培養(yǎng)基中的含鐵物質(zhì)反應(yīng) , 從而產(chǎn)生黑色的菌落 . 以上內(nèi)容來源于食品伙伴網(wǎng) 選用 TCBS 作為分離培養(yǎng)各種弧菌的培養(yǎng)基,其特異性不是很強(qiáng);不少細(xì)菌在 TCBS 上也能生長,當(dāng)生長較慢,需培養(yǎng) 24h 后方可長成 0.5~1mm 的黃,綠色菌落。為有效排除干擾,及時(shí)準(zhǔn)確地判別出是否存在弧菌屬細(xì)菌,可結(jié)合弧菌屬細(xì)菌在 TCBS 培養(yǎng)基上生長的特點(diǎn):弧菌生長快,菌落大,培養(yǎng) 4~5h 原劃線處有菌苔生長, 8~10h 可長出小菌落, 16h 菌落可達(dá) 2mm; 其他細(xì)菌在 TCBS 上無此特點(diǎn)。因此,在篩選弧菌屬細(xì)菌的選擇性培養(yǎng)基時(shí)要特別注意在確定的培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)進(jìn)行菌落的觀察,時(shí)間超過即影響其準(zhǔn)確性。 以上表 2 及文字節(jié)選自浙江工商大學(xué)趙廣英等人論文《水產(chǎn)品中多種致病性弧菌的分離鑒定》。 弧菌顯色培養(yǎng)基 原理: 目標(biāo)菌在該培養(yǎng)基上生長,代謝產(chǎn)生特異性的酶與酶底物作用,底物經(jīng)酶水解作用釋放顯色基團(tuán)使菌落顯色;魜y弧菌、擬態(tài)弧菌在該培養(yǎng)基上生長菌落呈(淡)藍(lán)綠色, 副溶血性弧菌在該培養(yǎng)基上生長菌落呈紫紅色。 使用方法 : 按說明書使用量(不同廠家重量略有不同)稱取培養(yǎng)基于 1L 蒸餾水或去離子水(可根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)際需要配比加水);充分混勻,加熱并不斷攪拌至完全溶解,煮沸約 2min; 滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至 50 攝氏度時(shí),鋪平板,待培養(yǎng)基完全凝固后使用。使用前儲存于暗處。劃線接種后于 37 ℃ 培養(yǎng) 24 小時(shí)。 保存 :干粉培養(yǎng)基于 30 ℃以下陰涼干燥處存放,制備好的平板于 2-8 ℃避光,可保存一周。 說明: 1 、同類產(chǎn)品存在不同配方,或采用不同的顯色劑,因此菌落形成的顏色不同。 2 、副溶血性弧菌在該顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)紫紅色菌落; 注意:本培養(yǎng)基中含有的成分對人體有毒害作用,使用時(shí)請做好防護(hù)措施,避免與眼睛、皮膚接觸,避免吸入或吞食。 目前有進(jìn)口科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基(干粉),國產(chǎn)陸橋弧菌顯色培養(yǎng)基(干粉),陸橋有新推出弧菌顯色培養(yǎng)基平板等產(chǎn)品。 按照國標(biāo)方法配置的 TCBS 培養(yǎng)基價(jià)格比價(jià)便宜;【@色培養(yǎng)基價(jià)格相對 TCBS 比較貴。一塊弧菌顯色培養(yǎng)基成本大約要十幾塊,對于蝦農(nóng)來說是一筆不小的開支。不過弧菌顯色培養(yǎng)基對于副溶血弧菌等目標(biāo)菌的分離效果要好于 TCBS 培養(yǎng)基,開發(fā)殺弧菌藥品,噬弧菌等的公司可以用來驗(yàn)證藥品殺弧菌,特別是殺副溶血性弧菌的驗(yàn)證。市面上水產(chǎn)用的 TCBS 培養(yǎng)基如果按照國標(biāo) GB4789.7 TCBS 配方生產(chǎn)的產(chǎn)品,也就是常用的黃弧菌,綠弧菌培養(yǎng)基,可能實(shí)際上對弧菌的分離效果并不明顯,國標(biāo) 4789.7 是食品行業(yè)的標(biāo)準(zhǔn),在檢出目標(biāo)菌后一般還有進(jìn)一步生化鑒定,以確定是哪類弧菌。但蝦農(nóng)并不具備進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的技術(shù)和能力,只能根據(jù)肉眼判斷黃弧菌或者綠弧菌,而無法得知是否是導(dǎo)致蝦病的致病弧菌。弧菌顯色培養(yǎng)基可以區(qū)分副溶血弧菌及其他幾種致病菌,對于殺弧菌產(chǎn)品的藥品公司有一定針對性,至少可以驗(yàn)證殺弧菌前后幾類致病弧菌的數(shù)量驗(yàn)證殺弧菌效果。
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光合細(xì)菌
小清哥
2015-12-30 09:44
從微生物學(xué)的角度上講,光合細(xì)菌(簡稱PSB)是一大類能進(jìn)行光合作用的原核生物的總稱,分為產(chǎn)氧光合細(xì)菌和不產(chǎn)氧光合細(xì)菌兩大類。產(chǎn)氧光合細(xì)菌主要是藍(lán)細(xì)菌,或稱之為藍(lán)藻和原綠藻,在分類上屬于藻類。 這里所說的光合細(xì)菌是能在厭氧光照條件下進(jìn)行不產(chǎn)氧的光合作用的原核生物。分為4個(gè)科:紅螺菌科、著色菌科、綠菌科和綠曲菌科。主要特征:含有光合色素——菌綠素;在厭氧、光照條件下進(jìn)行光合生長,且不產(chǎn)氧。 市場上見到的光合細(xì)菌劑型大致有液體制劑、濃縮液、固體制劑、凍干粉等。相對而言,液體制劑較容易大量培養(yǎng)和批量生產(chǎn),且培養(yǎng)物的活性較強(qiáng),光合細(xì)菌的代謝物含量豐富。應(yīng)用效果也較好,目前在各劑型中是使用量最大的一種。 在 水產(chǎn) 養(yǎng)殖 中運(yùn)用的光合細(xì)菌主要是光能異養(yǎng)型、紅螺菌科中的一些品種,我們主要介紹沼澤紅假單胞菌。根據(jù)農(nóng)業(yè)部1126號公告(2008),準(zhǔn)許沼澤紅假單胞菌以 飼料 添加劑的方式使用于養(yǎng)殖動(dòng)物。 沼澤紅假單胞菌生長的適宜水溫15—40℃,最適水溫為30—36℃。是兼性厭氧菌,是革蘭氏陰性菌,以小分子有機(jī)物、二氧化碳等作碳源,以氨、銨鹽、硝酸鹽或亞硝酸鹽作氮源。菌體蛋白質(zhì)含量高,并含有大量促進(jìn)魚蝦生長的活性因子,如生物素、維生素、β-類胡蘿卜素等,可明顯促進(jìn)養(yǎng)殖生物的生長發(fā)育,縮短養(yǎng)殖周期。并具有適應(yīng)性強(qiáng),能耐受高濃度的有機(jī)廢水和較強(qiáng)的分解轉(zhuǎn)化能力,對酚、氰等毒物也有一定的耐受和分解能力等特點(diǎn)。 一、 功能 1.凈化水質(zhì):沼澤紅假單胞菌可降解水體中的有機(jī)物;同時(shí),還能吸收利用水體中的氨、亞硝酸鹽、硫化氫等有害物質(zhì)。在處理生活污水時(shí),每天連續(xù)大量在污染水體中投放沼澤紅假單胞菌,消耗大量氮、磷等營養(yǎng)因子,會抑制浮游植物的生長。 2.作為飼料添加劑: 沼澤紅假單胞菌具有很高的營養(yǎng)價(jià)值,這正是它在 水產(chǎn)養(yǎng)殖 中作為培水餌料及作為飼料添加成分物質(zhì)基礎(chǔ)。 3.抑制藍(lán)藻水華:沼澤紅假單胞菌能大量利用水中的某些藍(lán)藻需要的有機(jī)物質(zhì),和藍(lán)藻形成生物競爭,在藍(lán)藻水華產(chǎn)生初期能有效抑制藍(lán)藻數(shù)量。 二. 制備方法 生產(chǎn)所需設(shè)備: 1、容積60L的白色塑料桶、漏斗、塑料勺(一級擴(kuò)培); 2、容積1噸的塑料罐,白色半透明為宜(二級擴(kuò)培); 3、功率不超過100瓦(一般采用75瓦)的潛水泵; 4、容積5L的透明塑料瓶若干。 一級擴(kuò)培:將2瓶紅色5升菌種和2袋500克定向培養(yǎng)基、100克膏狀培養(yǎng)基、1號瓶黃色液體培養(yǎng)基和90升自來水或井水混合均勻后再灌裝到20個(gè)5升的透明塑料瓶中,晴天曬5天左右(陰雨天或最高氣溫低于20℃時(shí)間需要延長,最低氣溫不得低于15度),每天早8時(shí)左右搖動(dòng)一次防止活菌沉淀,即可得到與菌種顏色和濃度一致的一級菌種。 二級擴(kuò)培:將得到的20瓶一級菌種、2袋5kg定向培養(yǎng)基、1kg膏狀培養(yǎng)基、2號瓶黃色液體培養(yǎng)基和900升自來水或井水混合均勻后再灌裝到200個(gè)5升的透明塑料瓶中,晴天曬5天左右(陰雨天氣時(shí)間需要延長),每天早8時(shí)左右搖動(dòng)一次防止活菌沉淀,即可得到與菌種顏色和濃度一致的成品。 注意:高溫季節(jié)正午時(shí)需要在瓶體外覆蓋遮陽網(wǎng)和灑水降溫,保證菌液溫度不超過45度,防止菌種被高溫及強(qiáng)紫外線殺死。 罐體內(nèi)部消毒步驟: 1、使用增壓水槍沖洗附著物(自來水或井水); 2、放掉臟水,再次加入自來水或井水(需要覆蓋出水口上方),加入適量二氧化氯消毒劑,浸泡、熏蒸10-30分鐘(加蓋); 3、放掉消毒水,關(guān)掉出水閥門,使用自來水或井水由上至下沖洗罐體,使蓄水量覆蓋出水口上方后全部放掉,完成消毒過程。 4、如果不間斷連續(xù)生產(chǎn)沼澤紅假單胞菌,則期間無需反復(fù)消毒。 三、科學(xué)的使用 1.用量用法: 沼澤紅假單胞菌的最宜使用時(shí)間應(yīng)該盡量在天亮后盡早使用,以最大限度的利用光照,充分發(fā)揮其功能。使用于養(yǎng)殖池塘?xí)r,700ml(按含沼澤紅假單胞菌100億個(gè)/ml的產(chǎn)品計(jì)算)用于1畝水面(不計(jì)水深);用水稀釋后均勻潑灑。大型水體可以和畜禽糞尿水同時(shí)潑灑。 沼澤紅假單胞菌作為飼料添加劑使用時(shí),可將菌液噴灑于飼料中拌勻即可,菌液用量為投喂飼料量的1-2%,現(xiàn)配現(xiàn)用。 2.使用條件: 一般來說,水溫達(dá)到15攝氏度或以上,天氣晴朗時(shí)使用最適宜。水體過肥時(shí)、早中晚水色無明顯變化的水體、底層水有腥臭味時(shí)、出現(xiàn)藻類水華早期癥狀時(shí),視情況使用1-2次沼澤紅假單胞菌;藍(lán)藻水華爆發(fā)嚴(yán)重的水體在使用沼澤紅假單胞菌的同時(shí)還需要視具體情況配合使用高水溶性的過磷酸鈣。 注意事項(xiàng):使用沼澤紅假單胞菌的前后三天內(nèi)盡量不要使用消毒劑和殺蟲劑
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對蝦養(yǎng)殖 菌類
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硝化細(xì)菌、芽孢桿菌和乳酸菌的主要缺點(diǎn)
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一片云
2015-6-30 17:32
硝化細(xì)菌 是降解水體中氨氮及亞硝酸鹽的專一菌株,屬 自養(yǎng)型 微生物,以環(huán)境中的 二氧化碳、亞硝酸鹽 等無機(jī)物質(zhì)為營養(yǎng),在體內(nèi)合成生長所需的有機(jī)物。 主要缺點(diǎn): 一、硝化細(xì)菌的 繁殖速度 慢 ,一般異養(yǎng)型微生物可在幾十分鐘內(nèi)增殖一倍數(shù)量,而硝化細(xì)菌則要1一2天才能增殖一倍的數(shù)量。 二、硝化細(xì)菌 對水體環(huán)境要求高,生長速度慢,難以快速處理水質(zhì)急劇惡化問題 。 硝化細(xì)菌適宜 生長在 有機(jī)物濃度低的環(huán)境中,水體中過多的有機(jī)物會抑制硝化細(xì)菌的生長與繁殖,減緩亞硝酸鹽的降解速度。 芽抱桿菌 生長速度快,能迅速降解養(yǎng)殖池中魚蝦排泄物、殘餌、尸體等有機(jī)物。 主要缺點(diǎn): 水體中亞硝酸鹽含量會出現(xiàn)反彈 。 由于芽抱桿菌大多具有硝酸鹽還原能力,能將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。因此,在水質(zhì)急劇惡化的養(yǎng)殖水體中使用芽抱桿菌制劑,起初氨氮水平快速降低,亞硝酸隨之也降低,但隨后水體中亞硝酸鹽含量出現(xiàn)反彈。 乳酸桿菌 在自然界分布最為廣泛,是地球生物圈的一個(gè)重要成員,在厭氧或兼性厭氧條件下能分解利用多種有機(jī)碳、氮物質(zhì)。 主要缺點(diǎn): 乳酸桿菌 不易保存和運(yùn)輸,易受溫度影響
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