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水產(chǎn)養(yǎng)殖中弧菌的分離檢測(TCBS培養(yǎng)基與弧菌顯色培養(yǎng)基)
flyjet
2016-7-12 23:40
水產(chǎn)養(yǎng)殖中弧菌的分離檢測 (TCBS 培養(yǎng)基與弧菌顯色培養(yǎng)基) TCBS 培養(yǎng)基分離弧菌 國標 GB4789.7-2013 食品微生物學(xué)檢測 副溶血性弧菌檢測 中 硫代硫酸鹽 - 檸檬酸鹽 - 膽鹽 - 蔗糖( TCBS )瓊脂配方: 酵母膏粉 5g ,蛋白胨 10g ,氯化鈉 10g ,檸檬酸鈉 10g ,硫代硫酸鈉 10g ,膽酸鈉 3g , 牛膽粉 5g ,蔗糖 20g ,檸檬酸鐵 1g ,瓊脂 15g ,溴麝香草酚蘭 0.04g ,麝香草酚蘭 0.04g 最終 pH 8.6 ± 0.2 TCBS 瓊脂的原理就是發(fā)現(xiàn)蔗糖發(fā)酵產(chǎn)生酸的菌落,霍亂陽性,副溶血性弧菌陰性, 副溶血性弧菌 不發(fā)酵蔗糖,菌落呈藍綠色。 霍亂弧菌 發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸,菌落呈黃色。然后,這些有機酸,也被這種細菌利用,分解成二氧化碳揮發(fā)了,有機酸沒有了,菌落就重新變成綠色的了。 該培養(yǎng)基中的牛膽粉有抑制其他革蘭氏陽性菌的作用,與枸櫞酸鈉和硫代硫酸鈉合用時,對大腸桿菌有明顯抑制作用。同時枸櫞酸鈉和枸櫞酸鐵可使霍亂弧菌免受其他抑菌劑的作用,加之有營養(yǎng)豐富的酵母浸粉,霍亂弧菌又能利用蔗糖分解產(chǎn)酸,所以菌落較大,且呈黃色。大腸桿菌等雜菌菌落較小或不生長,故易識別。 黃色菌落只要是利用培養(yǎng)基中的蔗糖產(chǎn)酸,菌落就是黃色的,像溶澡弧菌、河流弧菌、麥氏弧菌、等要本培養(yǎng)基上均為黃色菌落,并不是黃色菌落就是霍亂弧菌。樣品中常常存在大量可以發(fā)酵蔗糖的干擾細菌,常常會碰到整個平板會變黃色的現(xiàn)象。 另:霍亂弧菌一旦檢出要立即送有關(guān)部門,普通實驗室是不準保存的! 黑色:細菌分解含硫物質(zhì)產(chǎn)生硫化氫同時與培養(yǎng)基中的含鐵物質(zhì)反應(yīng) , 從而產(chǎn)生黑色的菌落 . 以上內(nèi)容來源于食品伙伴網(wǎng) 選用 TCBS 作為分離培養(yǎng)各種弧菌的培養(yǎng)基,其特異性不是很強;不少細菌在 TCBS 上也能生長,當生長較慢,需培養(yǎng) 24h 后方可長成 0.5~1mm 的黃,綠色菌落。為有效排除干擾,及時準確地判別出是否存在弧菌屬細菌,可結(jié)合弧菌屬細菌在 TCBS 培養(yǎng)基上生長的特點:弧菌生長快,菌落大,培養(yǎng) 4~5h 原劃線處有菌苔生長, 8~10h 可長出小菌落, 16h 菌落可達 2mm; 其他細菌在 TCBS 上無此特點。因此,在篩選弧菌屬細菌的選擇性培養(yǎng)基時要特別注意在確定的培養(yǎng)時間內(nèi)進行菌落的觀察,時間超過即影響其準確性。 以上表 2 及文字節(jié)選自浙江工商大學(xué)趙廣英等人論文《水產(chǎn)品中多種致病性弧菌的分離鑒定》。 弧菌顯色培養(yǎng)基 原理: 目標菌在該培養(yǎng)基上生長,代謝產(chǎn)生特異性的酶與酶底物作用,底物經(jīng)酶水解作用釋放顯色基團使菌落顯色;魜y弧菌、擬態(tài)弧菌在該培養(yǎng)基上生長菌落呈(淡)藍綠色, 副溶血性弧菌在該培養(yǎng)基上生長菌落呈紫紅色。 使用方法 : 按說明書使用量(不同廠家重量略有不同)稱取培養(yǎng)基于 1L 蒸餾水或去離子水(可根據(jù)實驗實際需要配比加水);充分混勻,加熱并不斷攪拌至完全溶解,煮沸約 2min; 滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至 50 攝氏度時,鋪平板,待培養(yǎng)基完全凝固后使用。使用前儲存于暗處。劃線接種后于 37 ℃ 培養(yǎng) 24 小時。 保存 :干粉培養(yǎng)基于 30 ℃以下陰涼干燥處存放,制備好的平板于 2-8 ℃避光,可保存一周。 說明: 1 、同類產(chǎn)品存在不同配方,或采用不同的顯色劑,因此菌落形成的顏色不同。 2 、副溶血性弧菌在該顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)紫紅色菌落; 注意:本培養(yǎng)基中含有的成分對人體有毒害作用,使用時請做好防護措施,避免與眼睛、皮膚接觸,避免吸入或吞食。 目前有進口科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基(干粉),國產(chǎn)陸橋弧菌顯色培養(yǎng)基(干粉),陸橋有新推出弧菌顯色培養(yǎng)基平板等產(chǎn)品。 按照國標方法配置的 TCBS 培養(yǎng)基價格比價便宜;【@色培養(yǎng)基價格相對 TCBS 比較貴。一塊弧菌顯色培養(yǎng)基成本大約要十幾塊,對于蝦農(nóng)來說是一筆不小的開支。不過弧菌顯色培養(yǎng)基對于副溶血弧菌等目標菌的分離效果要好于 TCBS 培養(yǎng)基,開發(fā)殺弧菌藥品,噬弧菌等的公司可以用來驗證藥品殺弧菌,特別是殺副溶血性弧菌的驗證。市面上水產(chǎn)用的 TCBS 培養(yǎng)基如果按照國標 GB4789.7 TCBS 配方生產(chǎn)的產(chǎn)品,也就是常用的黃弧菌,綠弧菌培養(yǎng)基,可能實際上對弧菌的分離效果并不明顯,國標 4789.7 是食品行業(yè)的標準,在檢出目標菌后一般還有進一步生化鑒定,以確定是哪類弧菌。但蝦農(nóng)并不具備進一步實驗的技術(shù)和能力,只能根據(jù)肉眼判斷黃弧菌或者綠弧菌,而無法得知是否是導(dǎo)致蝦病的致病弧菌。弧菌顯色培養(yǎng)基可以區(qū)分副溶血弧菌及其他幾種致病菌,對于殺弧菌產(chǎn)品的藥品公司有一定針對性,至少可以驗證殺弧菌前后幾類致病弧菌的數(shù)量驗證殺弧菌效果。
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